PCR實(shí)驗(yàn)室
博知行實(shí)驗(yàn)室 - 實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)解決方案最優(yōu)化
一、概述：
PCR實(shí)驗(yàn)室主要設(shè)在檢驗(yàn)科和病理科，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法，應(yīng)用于：艾滋病檢測(cè)、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測(cè)和診斷，動(dòng)植物檢疫等，化妝品、食品衛(wèi)生檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。
PCR實(shí)驗(yàn)室通常采用非單向流送風(fēng)方式，所謂非單向流，指氣流流線(xiàn)方向不平行，風(fēng)速也不一致。非單向流的氣流組織方式有上送下回式、上送下側(cè)回式、測(cè)送下回式、上送上回式、PCR實(shí)驗(yàn)室一般采用上送下回式。上部送風(fēng)依靠高效送風(fēng)口進(jìn)入房間，下部回風(fēng)依靠每個(gè)房間的對(duì)稱(chēng)分布的排風(fēng)柱下部的排風(fēng)口排風(fēng)。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。
如何才能設(shè)計(jì)一個(gè)合格的PCR實(shí)驗(yàn)室呢，簡(jiǎn)單的說(shuō)就是：各區(qū)獨(dú)立，注意風(fēng)向，因地制宜，方便工作，同時(shí)也要注意標(biāo)本的接收問(wèn)題。
1.試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)：該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對(duì)氣流壓力的控制，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。
2.樣品制備區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。
3.擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū)) 的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū)) 制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測(cè)定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。
本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。
三、實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)可參照以下條例：
《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB19489-2008
《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]8號(hào)文
《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)文
《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)文附件
《基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求》國(guó)家質(zhì)監(jiān)檢驗(yàn)總局SN/T1193-2003
《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境-生物污染控制》國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO14698
《潔凈廠(chǎng)房設(shè)計(jì)規(guī)范》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB500732013
《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》GB50591-2010
《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18832002
《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB50346-2011《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》衛(wèi)生部(2004-11-12)
四、PCR實(shí)驗(yàn)室建議：
沒(méi)有什么是一成不變的，要因地制宜，具體問(wèn)題要具體分析。要分析具體的情況制定符合自己當(dāng)前的需求，合乎國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)即可，不必強(qiáng)求理想狀態(tài)。
PCR實(shí)驗(yàn)室的建立離不開(kāi)以人為本，在做到防止污染的情況下，應(yīng)最大限度地考慮在日常檢測(cè)工作時(shí)是否方便。實(shí)驗(yàn)室的過(guò)道能否方便日后新設(shè)備的進(jìn)出，人員工作服和工作鞋的換穿是否方便。
在實(shí)驗(yàn)室裝修好后，按照實(shí)驗(yàn)室的需求放置試驗(yàn)臺(tái)，天平、冰箱、低溫冰箱、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、紫外燈、冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺(tái)、或者排風(fēng)柜排毒柜)、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、通風(fēng)排風(fēng)系統(tǒng)、水浴箱、Bioqure12全自動(dòng)核酸提取儀、Micgene242/244實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等。
最后，歡迎各位定制PCR實(shí)驗(yàn)室。我們擁有豐富的定制設(shè)計(jì)和建設(shè)經(jīng)驗(yàn)。
